SOP文件肝吸虫IgG抗体操作规程及

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目的：用于肝吸虫病抗体IgG的快速诊断范围：检验科免疫实验室责任人：免疫实验室专业组长和实验室工作人员检测原理：采用国内外先进的酶免疫技术研制生产的新一代肝吸虫病诊断试剂盒，它具有灵敏度和特异度高，快速方便的特点。样本收集：1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。操作步骤：1、配制洗涤液：1支浓缩洗涤液ml（48T）或（96T）蒸馏水。2、样本稀释：①待测血清样本稀释液按1：50稀释：μl样本稀释液+10μl待测血样。②或每孔加入μl样本稀释液后再加4μl血清样本，充分混合。3、加样：加入已稀释的样本，μl/孔，并设阴、阳性对照各1孔，空白对照（仅加样本稀释液）1孔，（已在孔内稀释的样本实验只加阴、阳、空白，μl/孔）置37℃温育10分钟。甩干孔内的液体，每孔加-μl已稀释好的洗涤液浸泡2-3分钟，洗3-5次，每次均需拍干。4、加酶结合物：每孔加酶结合物2滴（μl/孔），置37℃温育10分钟。甩干孔内的液体，每孔加-μl已稀释好的洗涤液浸泡2-3分钟，洗3-5次，每次均需拍干。5、显色：每孔加显色剂A及显色剂B各1滴（或50μl）混匀,37℃温育5分钟,取出判断结果。结果判断：1、目测：在白色背景下观察各孔显色，有明显兰色者为阳性，无色者为阴性。2、仪器检测：每孔加终止液1滴（50μl），轻摇，以空白对照调零，用酶标仪在nm波长测定各孔OD值。临界值：（C.O.）=阴性对照孔均值N×2.1(阴性对照孔OD值小于0.1是以0.1计)阳性：样本OD值S/C.O.≥1（S/N≥2.1）阴性：样本OD值S/C.O.1（S/N2.1）在临界值附近的样品，应重复检测，并结合临床症状综合判断。注意事项：1、使用前试剂应置室温平衡，用前摇匀，剩余包被板条应密封保存，以免受潮。2、本试剂盒置2-8℃贮存，有效期6个月，不同批号试剂不能混用，标本稀释液及酶结合物不能冻结。3、所有样品都应按传染源处理。参考范围：阴性临床意义：华支睾吸虫，又称肝吸虫。成虫寄生在人体的肝胆管内，可引起肝吸虫病。是一种严重危害人体健康的人兽共患寄生虫病，被列为我国新五大寄生虫病之一。华支睾吸虫病在我国至少已有2年以上历史。据估计在远东及东南亚地区大约有0万人感染肝吸虫，在我国广泛分布，己知25个省、市、自治区有此病流行，黑龙江省的感染率位居全国第二。人群感染率在1％～30％之间。食入含有该虫囊蚴的生鱼是本病的主要感染方式。由于生活在流行病区的个体，长期反复接触感染以及肝吸虫逃避或抵抗特异免疫反应的能力造成了肝吸虫病多呈慢性过程，该病临床症状无特异性，早期不易发现，多数患者在发现并发症时才来诊治，大多数人对本病缺乏认识，肝吸虫病极易误诊为肝胆疾病。临床症状以疲乏、上腹不适、消化不良、腹痛、腹泻、肝区隐痛、头晕等较为常见，但许多感染者并无明显症状。常见的体征有肝肿大，脾肿大较少见，偶见发育欠佳类似侏儒症者。严重感染者在晚期可造成肝硬变腹水，甚至死亡。华支睾吸虫病的危害性主要是患者的肝受损。在成虫寄生于肝胆管期间，华支睾吸虫以胆管粘膜和分泌物为食，长期刺激胆管，破坏胆道上皮而引起胆管炎，感染虫数多时虫体堵塞肝胆管引起胆液淤积、胆管扩张，继而引起肝细胞脂肪变性和萎缩等病理改变。由于成虫不断产卵、产生代谢产物及内毒素，导致慢性免疫反应、病理组织损伤和免疫调节异常，对机体肝功能造成很大影响。目前，多数学者认为华支睾吸虫与胆石症、胆管炎、肝硬化有着密切的因果关系，与原发性肝癌也有密切的相关关系。形态：成虫体形狭长，背腹扁平，前端尖细，后端略钝，体表无棘。虫体大小一般为10～25mm×3～5mm。生活史：成虫寄生于人或哺乳动物的胆管内。虫卵随胆汁进入消化道混于粪便排出，在水中被第一中间宿主淡水螺吞食后，在螺体消化道孵出毛蚴，穿过肠壁在螺体内发育，经历了胞蚴、雷蚴和尾蚴3个阶段。成熟的尾蚴从螺体逸出，遇到第二中间宿主淡水鱼类，则侵入鱼体内肌肉等组织发育为囊蚴。终宿主因食入含有囊蚴的鱼而被感染。囊蚴在十二指肠内脱囊。一般认为脱囊后的后尾蚴沿胆汁流动的逆方向移行，经胆总管至肝胆管，也可经血管或穿过肠壁经腹腔进入肝胆管内，通常在感染后1个月左右，发育为成虫。一般认为成虫在人体的寿命可长达20～30年。本虫对宿主的特异性要求并不严格。终宿主除肉食哺乳类动物外，在兔、豚鼠等食草动物也能正常发育。第一中间宿主淡水螺的种类很多，在我国至少有3科8种，常见的有纹沼螺、长角涵螺和赤豆螺等。对第二中间宿主的选择更不强，国内已证实的淡水鱼宿主有12科39属68种。但从华支睾吸虫流行病学的角度看，养殖的淡水鲤科鱼类，如白鲩（草鱼）、黑鲩（青鱼）、鳊鱼、大头鱼、土鲮鱼、鲤鱼等特别重要。野生小型鱼类如麦穗鱼感染率较高。华支睾吸虫病在一个地区流行的关键因素是当地人群有吃生的或未煮熟的鱼肉的习惯。由于各地吃鱼方法不同，感染的方式和对象也不一样。在广东主要通过吃“鱼生”“鱼生粥”或烫鱼片而感染，男性成年人的感染率较高；在东北地区，特别是朝鲜族居民主要是通过生鱼佐酒吃而感染，亦以男性成年人较多；此外一些地区，如北京、山东、河北、四川等地多以从河沟、池溏捉的鱼烧吃或烤吃而感染，主要为20岁以下的青少年和儿童；抓鱼后不洗手或用口叨鱼也是感染的原因；使用切过生鱼的刀及砧板切熟食物品，用盛过生鱼的器皿盛熟食物品也有使人感染的可能。实验证明：在厚度约1mm的鱼肉片内含有的囊蚴，在90℃的热水中，一秒钟即能死亡，75℃时3秒内死亡，70℃及60℃时分别在6及15秒内全部死亡。囊蚴在醋（含醋酸浓度3.36％）中，可活2个小时；在酱油中（含NaCl19.3％）5小时全部死亡。但在烧、烤、烫或蒸全鱼时，可因温度不够、时间不足或鱼肉过厚等原因，未能杀死全部囊蚴。防治原则大力做好卫生宣传教育，提高群众对本病传播途径的认识，自觉不吃生的或不熟的鱼虾。改进烹调方法和改变饮食习惯,注意分开使用切生、熟食物菜刀、砧板及器皿。也不用生鱼喂猫犬。积极治疗病人和感染者，是保护人民健康、减少传染源的积极措施。治疗药物目前吡喹酮（Praziquantel）为首选药。

●检验图谱

粪便中常见医学蠕虫卵的形态

●检验图谱

疟原虫形态

●检验图谱

尿液管型和结晶

●检验图谱

四种疟原虫姬氏染色各期形态

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